2013年 · 第93卷第10期

目的总结尿源性败血症的发病特点、早期症状及诊治经验，降低发生率及病死率。方法回顾性分析浙江大学附属第一医院2008年8月至2012年4月因泌尿系疾病治疗过程中并发的尿源性败血症30例患者的临床资料，探讨尿源性败血症的早期症状、早期诊治措施及转归。30例中，男10例，女20例，平均年龄55.7岁。其中，输尿管结石行钬激光碎石术后3例，一侧输尿管梗阻后继发3例，经尿道前列腺电切（TURP）术后2例，经尿道膀胱肿瘤电切（TURB）术后1例，膀胱全切+Bricker膀胱术后3例，经皮肾镜碎石（PCNL）术中、术后18例。结果12例PCNL患者术中即出现非出血因素引起的血压明显下降。26例术后2 h即出现寒战、高热。血压下降和高热是尿源性败血症的最早症状。经积极抗感染和对症处理，27例抢救成功，3例死亡，1例为输尿管镜下钬激光碎石术后，1例为PCNL术后，1例为TURP术后，病死率10%。结论尿源性败血症起病隐匿，一旦发生，则发展迅速，难以逆转，早期诊治有利于提高抢救成功率。

目的探讨TaqMan扩增阻滞突变系统（ARMS）法检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的价值。方法收集2008年1月至2011年3月，北京4家三级甲等医院的199例NSCLC患者外科手术切除的肺部肿瘤组织预留石蜡样本，比较TaqMan-ARMS法和DNA测序法检测EGFR外显子19和21（EGFR19和EGFR21）的突变情况。结果TaqMan-ARMS法检测的EGFR19和EGFR21总突变率为19.1%（38/199），按不同病理类型分：腺癌35.0%（36/103），鳞癌2.2%（2/93），腺鳞癌0；而DNA测序法检测的EGFR19和EGFR21总突变率为19.6%（39/199），按不同病理类型分：腺癌35.9%（37/103），鳞癌2.2%（2/93），腺鳞癌0。两种方法检测的NSCLC患者EGFR基因突变率差异无统计学意义，具有高度一致性（P=1.000，κ=0.984）。两种方法检测的腺癌组织EGFR基因的突变率均高于鳞癌和腺鳞癌。结论TaqMan-ARMS法与DNA测序法在检测NSCLC组织的EGFR基因突变上具有较好的一致性。

目的观察分析共刺激分子CD40在格雷夫斯病甲状腺组织中的表达及其免疫病理意义。方法选取2008年1月至2010年12月南京医科大学附属苏州医院和苏州大学附属第三人民医院收治的甲状腺手术患者甲状腺组织8例，其中3例为格雷夫斯病，5例为非毒性甲状腺肿。运用免疫组织化学染色技术检测CD40分子在甲状腺组织中的表达;运用原代培养技术体外培养甲状腺滤泡细胞（TFC)，分别加入细胞因子γ干扰素（IFN-γ）（IFN-γ刺激组）、白细胞介素（IL）-6（IL-6刺激组）或肿瘤坏死因子-α（TNF-α）（TNF-α刺激组）刺激，设不加细胞因子组为无刺激组，培养3 d后，用流式细胞术检测各组TFC表面CD40分子的表达;加入激发型CD40单抗5C11（IFN-γ+ CD40组）或小鼠IgG抗体（IFN-γ+ mIgG组）与IFN-γ刺激组TFC共培养3 d后，用噻唑蓝（MTT）法检测TFC的体外增殖;放免法检测各组TFC培养上清中游离三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）和甲状腺球蛋白（Tg）的水平。结果CD40分子表达于格雷夫斯病患者甲状腺组织中TFC表面，而在非毒性甲状腺肿TFC表面未见阳性表达。IFN-γ刺激组、IL-6刺激组、TNF-α刺激组原代培养TFC表面CD40分子的表达分别为86.4%±4.6%、90.0%±4.2%、87.3%±4.2%，均显著高于无刺激组的23.7%±7.3%（均P<0.01）。IFN-γ+CD40组TFC增殖能力明显高于IFN-γ+ mIgG组（1.14±0.14比0.75±0.06，P<0.01）;IFN-γ+CD40组TFC培养上清中分泌的FT3、FT4和Tg分别为（1.10±0.15）、（0.80±0.14）pmol/L和（30.23±1.60）μg/L，均显著高于IFN-γ+mIgG组的（0.76±0.07）、（0.63±0.09）pmol/L和（21.37±3.22）μg/L（均P<0.05）。结论共刺激分子CD40异常表达于格雷夫斯病患者甲状腺组织，其介导的共刺激信号可能参与了格雷夫斯病的免疫病理机制。

目的探讨精氨酸刺激试验及静脉葡萄糖耐量试验、口服葡萄糖耐量试验评估不同糖耐量人群的胰岛β细胞功能的价值。方法横断面选取2003年1月至2007年6月中山大学附属第二医院内分泌科无糖尿病家族史的正常糖耐量（NGT FH-）者38名、有糖尿病家族史的正常糖耐量（NGT FH+）者32名、无糖尿病家族史的糖调节受损（IGR FH-）者31例、有糖尿病家族史的糖调节受损（IGR FH+）者36例及新诊断的2型糖尿病（T2DM）患者35例参与本试验，均行精氨酸刺激试验、静脉葡萄糖耐量试验和口服葡萄糖耐量试验。计算精氨酸刺激后急性C肽反应（ACRARG)，第一时相胰岛素分泌功能指数（AIR0-10）、早期胰岛素分泌功能指数（ΔI30/ΔG30)，分析不同糖耐量人群各胰岛β细胞功能指数的变化。结果①ACRARG5组间比较差异均无统计学意义。②AIR0-10: T2DM组低于其余4组，差异均有统计学意义（均P<0.01）；IGR FH+组与IGR FH-组比较差异无统计学意义，而低于NGT FH+及NGT FH-组，差异均有统计学意义（均P<0.01）；IGR FH-组低于NGT FH+及NGT FH-组，差异有统计学意义（P<0.05，<0.01）；NGT FH+组低于NGT FH-组，差异均有统计学意义[50.0（24.3~85.1）比69.4（46.1~94.8），P<0.05]。③ΔI30/ΔG30: T2DM组与IGR FH+组比较差异无统计学意义，而低于其余3组，差异均有统计学意义（均P<0.01）；IGR FH+组及IGR FH-组均低于NGT FH+及NGT FH-组，差异均有统计学意义（均P<0.01）；有或无家族史的IGR及NGT组间比较差异均无统计学意义。结论精氨酸刺激试验测定的C肽增值不适用于评估糖尿病早期、糖调节受损及糖尿病高危人群的早期时相胰岛功能变化。

目的总结牵引成骨关节成形术（TDOAP）治疗颞下颌关节（TMJ）骨性强直的临床应用。方法1999年10月—2011年10月，应用TDOAP治疗就诊于北京大学口腔医院正颌外科中心的73例TMJ骨性强直患者，男39例，女34例，年龄3~60岁，平均年龄19.6岁。其中27例为关节强直术后复发患者。30例合并重度小下颌畸形患者同时伴有不同程度的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）。术前开口度1~20 mm，平均开口度为6.6 mm。术中去除关节区增生骨性粘连，于升支后缘制备移动骨段，以关节成形牵引器将移动骨段和升支残端固定。术后间歇期3~7 d。术后第4~8天开始牵引，牵引速度0.25 mm/次，4次/d（1 mm/d）。稳定期（3~6个月）后拆除牵引器。术后即行开口训练。结果本研究共完成73例患者的89侧TMJ的TDOAP治疗（其中4例双侧TMJ强直患者的一侧关节应用TDOAP治疗，另一侧关节应用其他术式进行关节成形）。牵引长度12~23 mm。平均牵引量15.3 mm。术后随访时间18~102个月，平均44.8个月。73例患者中8例出现复发，复发率11.0%。其中双侧关节强直复发病例4例；单侧关节强直复发病例4例。患者年龄>15岁的37例患者中有1例复发，复发率为2.7%。患者年龄<15岁的36例患者中有7例复发，复发率为19.4%。结论TDOAP是治疗TMJ骨性强直的有效手段。儿童患者特别是复发病例的手术应尽可能安排在青春期后进行以降低复发率。在解决关节强直的同时应考虑对小下颌畸形和OSAHS的治疗。

目的探讨急性髓系白血病（AML）患者异柠檬酸脱氢酶（IDH）1及IDH2基因突变的发生率，并探讨其临床特征及意义。方法选取2005年2月至2011年3月经MICM分型确诊的570例初治AML患者，采用骨髓单个核细胞基因组DNA，PCR方法扩增IDH1、IDH2基因4号外显子，基因测序检测IDH1 R132及IDH2 R140/R172基因突变，分析患者临床特征并判定其疗效。结果570例AML患者中90例检测到IDH基因突变，突变率为15.79%，其中IDH1突变27例（4.74%），IDH2突变63例（11.05%）。未发现有患者同时获得IDH1和IDH2突变。IDH突变与FAB分型中AML-M1显著相关（P<0.01）；突变组年龄、初诊外周血血小板计数与未突变组比较，差异有统计学意义（中位数:53岁比40岁，52×109/L比31×109/L，均P<0.01）；IDH基因突变与正常核型、NPM1基因突变，尤其是NPM1基因突变未伴FLT3-ITD基因突变的基因型相关，但与WT1、FLT3-TKD及MLL-PTD突变无明显的相关性。在非M3型患者中，突变组的化疗完全缓解率低于未突变组（58.1%比77.9%），差异有统计学意义（P<0.05）。在不伴NPM1基因突变的患者或在正常核型的亚群中，IDH基因突变者预计2年总生存率低于该基因未突变者（28.4%比51.3%， P<0.01）。结论IDH基因突变更易存在于年龄偏大的AML患者中，IDH突变与临床特点、疗效具有一定相关性，提示是预后不良的分子学标志。

目的观察磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4（phosphorylated MKK4，pMKK4）在结直肠癌组织中的表达及其与预后的关系。方法通过构建组织芯片，用免疫组化染色方法检测343例含随访的结直肠癌组织中丝氨酸257/苏氨酸261位点磷酸化MKK4（S257/T261 pMKK4）的表达，分析其与临床病理资料的相关性，并用Kaplan-Meier法进行生存分析，Cox比例风险模型进行单因素及多因素分析。结果pMKK4主要在结直肠癌细胞胞质中表达。阴性表达率为49.0%（168/343）、阳性表达率为51.0%（175/343）；其中，弱阳性表达率为26.8%（92/343)，中阳性表达率为16.0%（55/343)，强阳性表达率为8.2%（28/343）。pMKK4的表达水平与浸润深度（P=0.003）、分化程度（P=0.018）、淋巴结转移（P<0.001）、远处转移（P<0.001）、肝转移（P=0.039）及TNM分期（P<0.001）相关。pMKK4表达呈阴性及阳性的患者平均生存期分别为（89.7±3.6）个月和（96.8±3.6）个月，相应的5年生存率分别为70.0%±3.6%、77.5%±3.3%。pMKK4表达强阳性的患者较中、弱及阴性的患者总体生存差异有统计学意义（Log rank=4.531，P=0.033）。Cox模型单因素分析显示pMKK4表达和总体生存有关（HR=0.785，P=0.035)，且与无复发生存有关（HR=0.788，P=0.044）。Cox模型多因素分析pMKK4不是结直肠癌独立的预后因素。结论S257/T261 pMKK4在结直肠癌中表达的下降与结直肠癌浸润深度、分化程度、分期以及转移相关，表达强阳性的患者比表达下降的患者有更好的预后，但其不是结直肠癌独立的预后因素。

目的了解血管内皮生长抑制因子（VEGI）在散发性肾透明细胞癌（CCRCC）中的表达情况，分析其与CCRCC病理分级和分期等的关系。方法应用Western印迹及免疫组化技术分析肾透明细胞癌细胞（786-O细胞）、CCRCC组织以及配对正常肾脏组织中VEGI的表达情况。研究包括CCRCC患者50例，男37例，女13例;年龄（53±12）岁；肿瘤直径<7 cm 33例，≥7 cm 17例；病理分级G114例，G222例，G314例；病理分期T 132例，T 210例，T38例。结果VEGI主要于细胞质中表达;且在正常肾小管上皮细胞质中表达水平，平均吸光度（A）值为0.40±0.16，明显高于CCRCC组织（A值为0.11±0.06)，P<0.01；CCRCC病理分级与VEGI的表达阳性率、表达强度及平均光密度值间均呈负相关关系（r=-0.640，P<0.01;r=-0.831，P<0.01;r=-0.781，P<0.01）；VEGI在≥7 cm肿瘤（平均A值为0.08±0.04）的表达水平明显低于<7 cm肿瘤（平均A值为0.12±0.06，P<0.05）；但其表达与患者年龄、性别以及肿瘤分期无关（P>0.05）。结论VEGI主要表达于正常肾小管上皮细胞和肾细胞癌细胞胞质中，正常肾组织中VEGI的表达水平明显高于肿瘤组织，且这种差异随肿瘤病理分级的升高更为显著，两者呈负相关关系，提示VEGI在肾细胞癌的发生和发展中可能起着负向调控作用。

目的制作小型猪重度烧伤休克的稳定模型。方法按随机数字表法将12只4~6月龄雌性广西巴马小型猪分为A、B两组各6只，静脉麻醉等处理后，以凝固汽油燃烧制作占体表总面积（TBSA）40%的皮肤烧伤（A组45 s，B组50 s），肉眼与组织病理学检查判断创面深度;在烧伤后2 h进行复苏，记录每小时心率、血压、尿量、中心静脉压（CVP）、肺动脉契压（PAWP）及烧伤前和烧伤后第1、2个24 h液体实际输入量，根据伤后2 h的休克指数判断休克状态。结果A、B两组均完成烧伤模型制作，烧伤创面分别呈深Ⅱ、Ⅲ度改变。烧伤后2 h与烧伤前比较，两组猪均呈现心率加快[（111±6）比（74±9）、（119±13）比（75±13）次/min]、尿量减少[（0.99±0.06）比（1.45±0.05）、（0.82±0.04）比（1.47±0.06）ml·kg-1·h-1]、CVP与PAWP下降，差异均有统计学意义（均P<0.05）；而血压无显著变化[（120±6/93±9）比（120±6/94±6）、（121±15/90±11）比（124±10/91±8）mm Hg]，差异均无统计学意义（均P>0.05）;烧伤后48 h内血压均值组间差异均无统计学意义（均P>0.05）。A、B组烧伤后第1个24 h复苏液体量分别为（1.53±0.05）、（1.66±0.10）ml·kg-1·1%-1TBSA，差异有统计学意义（P<0.05），两组液体进出量比值差异均无统计学意义（P>0.05）；烧伤后第2个24 h的复苏液体量分别为（0.65±0.16）、（0.69±0.17）ml·kg-1·1%-1TBSA，差异无统计学意义（P>0.05），液体进出量比值差异无统计学意义（P>0.05）。A、B组在2 h时相点的休克指数分别为0.92±0.07、1.00±0.16，差异无统计学意义（P>0.05）。结论本法制作的小型猪重度烧伤休克的模型稳定可靠。

目的研究来氟米特对高糖诱导的足细胞裂孔隔膜及细胞骨架的影响，并探讨其信号通路。方法条件永生的人肾小球足细胞系分为正常糖组、甘露醇高渗透压对照组、高糖组、高糖+PDTC（pyrrolidine dithiocarbamate，为NF-κB通路特异性抑制剂）组及高糖+A771726（来氟米特活性代谢产物）组。Western印迹法测定足细胞NF-κBp65途径的活化即p- NF-κBp65/NF-κBp65比值， Western印迹法、反转录PCR测定NF-κBp65、TRPC6、nephrin在肾小球足细胞的表达。免疫荧光染色法检测足细胞骨架的变化。结果（1）高糖刺激足细胞激活NF-κBp65信号通路，60 min时p-NF-κBp65蛋白表达比0 min时显著增加（1.20±0.04比0.79±0.02，P<0.01）；正常糖组和甘露醇高渗透压对照组仅有少量NF-κBp65活化；PDTC及A771726可明显抑制p-NF-κBp65表达（均P<0.05)，NF-κBp65 mRNA表达各组之间差异均无统计学意义（均P>0.05）。（2）高糖刺激足细胞激活NF-κBp65信号通路后，TRPC6 mRNA及蛋白表达较正常组高，nephrin mRNA及蛋白表达较正常组低;PDTC及A771726可抑制TRPC6高表达，使nephrin表达较高糖组高（均P<0.05）。（3）免疫荧光法检测高糖刺激足细胞72 h后可见细胞骨架蛋白微丝肌动蛋白紊乱及张力纤维消失。结论来氟米特活性代谢产物A771726可通过阻断高糖诱导的NF-κBp65信号通路的活化对足细胞起保护作用。

目的分析CD40分子活化对肺癌细胞株H1299体外增殖、侵袭能力的影响，探讨磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-AKT）信号途径在上述过程中的作用。方法细胞计数方法-8（CCK-8）检测CD40分子活化对H1299细胞的增殖效应;划痕实验、Transwell小室模型分析CD40分子活化对H1299细胞侵袭能力的影响；Western印迹检测CD40激发对H1299细胞磷酸化的PI3K-AKT蛋白表达的调节；酶联免疫吸附（ELISA）法测定CD40对H1299细胞分泌基质金属蛋白酶9（MMP-9）的变化。结果CCK-8法示5C11组细胞在不同时间其吸光度（A）值均明显提高，在96 h时10.0 mg/L浓度5C11组（2.75±0.35）显著高于对照组（1.72±0.18）（P<0.05）；划痕实验示24 h后5C11组划痕宽度均明显减少，10.0 mg/L浓度5C11组划痕宽度为（0.05±0.01）mm，缩短最明显，与对照组的（1.62±0.32）mm相比，差异有统计学意义（P<0.05）; Western印迹示：5C11激发H1299细胞10 min后磷酸化AKT蛋白开始增加，30 min时非常显著，p-AKT表达（0.65±0.28）与初始状态表达（0.33±0.16）相比，差异有统计学意义（P<0.05)，加入LY294002后，p-AKT水平受到抑制;侵袭实验示5C11组穿过微孔贴于下室的细胞数（168±31）比对照组（105±19）明显增多，差异有统计学意义（P<0.05)，5C11+LY294002组下室细胞数（118±21）与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）；ELISA检测示5C11组MMP-9浓度为（192±31）ng/L，与对照组的（110±23）ng/L相比，差异有统计学意义（P<0.05)，5C11+LY294002组MMP-9浓度为（120±21）ng/L，与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。结论CD40分子活化对肺癌细胞H1299具有促进体外增殖、侵袭能力，其机制部分在于CD40分子激发介导的PI3K-AKT信号活化。